Práctica del ADN
En esta entrada os explicaré la práctica que realizamos en la universidad. El fin de esta práctica era obtener ADN a partir de una hoja de planta de tomate.
Realizamos la practica en parejas pero cada uno trabajaba con su propia muestra, empleamos distintos materiales que nos ayudaron a llevar acabo las operaciones requeridas.
#(fuente propia)
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1) Introducir una hojita pequeña de tomate en cada tubo. Si es demasiado grande se coge un
trozo.
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2) Añadir 250 μl de tampón de extracción (Tris 100 mM pH 8, EDTA 50 mM pH 8 y NaCl 500
mM). Todas las sustancias con las que vamos a trabajar serán para romper barreras y separar el ADN de las proteínas y para trabajar cómodamente con las muestras empleamos una rejilla como la de la imagen.
#(fuente propia) -
3) Triturar con un “palito azul” hasta que no queden restos de hoja.
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4) Añadir 250 μl de tampón de extracción. Mezclar con el palito. Para añadir o retira todas las sustancias requeridas durante la práctica, utilizamos pipetas monocanales para trabajar con mayor precisión.
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#(fuente propia)5) Añadir 35 μl de SDS. Agitar suavemente para no formar demasiada espuma.
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6) Incubar los tubos a 65 oC durante 5 minutos. Para incubar las muestras utilizamos una incubadora de laboratorio.
#(fuente propia)
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7) Añadir 130 μl de acetato de potasio 5 M.
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8) Incubar a temperatura ambiente durante 5 minutos ( dejar en reposo).
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9) Centrifugar los tubos a 13.000 rpm durante 10 minutos. Para ello se emplea una centrifugadora de laboratorio, colocando las muestras una en el punto opuesto a la otra para mantener un equilibrio en la máquina.
#(fuente propia)
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10) Pasar el sobrenadante (500 μl) a otro tubo limpio, rotulado convenientemente. Procurar no
arrastrar restos.
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11) Añadir 500 μl de isopropanol y 60 μl de acetato de sodio 3 M.
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12) Incubar a temperatura ambiente durante 10 minutos.
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13) Centrifugar los tubos a 13.000 rpm durante 10 minutos.
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14) Eliminar la mayor cantidad posible del líquido sobrenadante, sin arrastrar el precipitado.
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15) Añadir 300 μl de etanol al 70 %. Golpear el tubo para que el precipitado se desprenda del
fondo.
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16) Centrifugar los tubos a 13.000 rpm durante 5 minutos.
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17) Eliminar la mayor cantidad posible de alcohol. Si queda, dejar los tubos abiertos para que
se evapore.
*No todos los procesos realizados en el guión se realizaron, aún así no supusieron mucha relevancia y pudo realizarse la práctica.
-Una vez realizados todos los pasos correctamente se obtiene como producto final el ADN:
#(fuente propia)
Este sería el resultado final, aunque no se aprecie muy bien se puede apreciar una pequeña mota blanca, en teoría este es el ADN de la hoja de tomate.
Actividades
-En este apartado os dejare las actividades que nos mandó la profesora sobre la especiación, uno de los apartados dl tema de las mutaciones.
#(fuente propia)
#(fuente propia)
